细胞复苏后状态不佳,该如何调整?
细胞复苏后状态差的原因及解决方法,复苏时可根据以下情况及时进行调整。
1. 细胞冻存不当
解决方法:可以尝试调整细胞状态,加大血清比例,后面再继续传代调整。
2. 自行制备的冻存细胞无活性
解决方法:制备冻存细胞时使用传代次数少且处于对数期的细胞;提高冻存密度有助于提升复苏存活率,推荐密度为100~300万细胞/mL。
3. 细胞复苏方法不当
解决方法:复苏讲究“快融",越快融化,细胞所受损伤就越小。确保冷冻细胞解冻迅速,接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。
4. 复苏培养基使用不当
解决方法:确保培养基使用前已经预热,并且尽快移除含有冷冻保护剂的培养基,防止活力下降。
5. 处理细胞时动作不够轻柔
解决方法:冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外),也不要高速离心细胞。
6. 细胞稀释过度
解决方法:将解冻后的细胞高密度接种,以改善复苏效果。
7. 冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光
解决方法:如果未避光储存,冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质;建议新取一只冻存保护剂,重新冻存细胞。
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