如何选择二抗

如何选择二抗

二抗：二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上面通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在

免疫学实验中得以应用广泛，如western blot（通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质），ELISA（以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异

性的蛋白质，尤其是相应的抗原或抗体），免疫组织化学（检测组织中的特异性抗原），免疫细胞化学（通过免疫学方法检测细胞的抗原

组成），流式细胞术（通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞）及免疫沉淀（通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应

抗原）。

1.二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体均具有特异性，因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用

；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。二抗可以耦联有几种不同的标记，可以是酶

，荧光素，或生物素。

 二抗的种属来源

一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。

然而在一些特殊的实验里，如双标实验里，如果其中一个一抗是山羊来源的，一个是小鼠来源的，则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的

二抗，这时候，二抗就不能选择山羊或者小鼠来源的。选择相应的驴来源的二抗，就非常适合做类似双标的免疫实验。双标得2个都抗才行，

故选择第3个种源的抗体。

2.选择哪种形式的二抗，是整个IgG分子，F(ab')2片段，还是Fab片段？

整个IgG分子：此种抗体适用于多数情况。

F(ab')2片段：该种抗体是由两个靠二硫键连接的用于结合抗原的Fab片段组成，这些抗体用在特定的情况中，如需要避免抗体与具有Fc受体

的细胞结合的情况。

Fab片段：它们只有一个结合位点，一般用来封闭内源性免疫球蛋白。

3.二抗的耦联标记

一般来讲，耦联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），荧光基团（FITC, RRX, TR, PE）

和生物素。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于western blot和ELISA，常用的二抗是酶标二抗，而细胞或组织标记实验（

细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的

二抗。如果想要更大程度的放大检测信号，可以使用biotin/avidin检测系统。在一些荧光检测方案中，则需要选择不同的荧光标记；

而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。