铁检测试剂盒(亚铁嗪微板法)操作流程説明

铁检测试剂盒(亚铁嗪微板法)

产品简介：

铁是人体必需微量元素，总含量约为3270mg，铁分布较广，有67.6%的铁作为血红蛋白分子的辅基分布于血红蛋白中，参与铁的运输﹔骨骼和肌红蛋白中各存在2.59%和4.15%，储存铁约占25.37%血清中铁均以三价铁离子形式与转铁蛋白结合，因此测定血清铁时，首先需要Fe³⁺与转铁蛋白分离。

上海雅吉生物科技有限公司登录正版铁检测试剂盒(亚铁嗪微板法)是采用分光光度法以亚铁嗪为底物进行铁的检测，在酸性介质中与转铁蛋白结合的血清铁从转铁蛋白中解离出来，其他样品中的铁在酸性介质环境下也会被解离，再被还原剂还原为Fe²⁺，后者与亚铁嗪生成紫红色化合物，通过酶标仪检测562nm处吸光度，适用于检测血清、血浆、组织等样品中的铁含量;上述检测方法属于直接检测法，应设血清空白，纠正血清本身的色度，根据公式计算出铁含量，该检测试剂盒在140μmol/L以下线性关系良好,甘油三脂≤3.39mmol/L胆红素≤171μmol/L ,对本法基本无干扰。

该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1、酶标仪、96孔板

操作步骤(仅供参考)：

1(选做)制备样品︰

①浆、血清样品︰血浆、血清按照常规方法制备，-20℃冻存，用于Fe的检测。

②细胞或组织样品︰取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于Fe的检测。

③高浓度样品︰如果样品中含有较高浓度的Fe，可以使用ddH₂O稀释，不宜使用普通蒸馏水稀释。

④(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的Fe含量。

2、制备铁标准工作液︰取适量的铁标准(100μg/ml)，按铁标准(100μg/ml):铁标准稀释

液=1:49的比例配制铁标准(2μg/ml)，即为铁标准工作液;4℃避光保存，3个月有效。

2、Fe加样:选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的96孔板，按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡﹔如果样品中的铁离子含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。

4、Fe检测︰混匀，室温静置15min或37℃孵育10min，以空白孔调零，酶标仪562nm处检测标准孔、测定孔的吸光度(即为A_标准，A_测定)，1h内比色完毕。

计算:

血浆、血清铁(μmol/L)={[A_测定一(A_血清空白×0.97)]/A_标准×35.8

组织铁(μmol/g)={[A_测定-(A_血清空白×0.97)]/A_标准×35.8/待测样本蛋白浓度(g/L)

式中:

A_测定=测定孔加入亚铁嗪显色液后测得的吸光度

A_血清空白=测定孔未加入亚铁嗪显色液前测得的吸光度

A_标准=标准孔的吸光度

单位换算∶铁标准(2μg/ml)=铁标准(35.8μmol/L)

μg/dl=μmol/L/0.179

μmol/L=0.179*μg/dl=17.9*μg/ml

参考区间∶

成年健康人血清铁∶

男性:11~30μmol/L(60~170μg/dl)

女性:9~27μmol/L(50~150μg/dl)

注意事项∶

1、溶血样本对检测有干扰，尽量避免采用溶血样本。

2、如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

3、实验过程中用到的水，不可用普通的蒸馏水，尽量采用高纯度的去离子水。4、玻璃器材需要10%的盐酸浸泡24h，取出后用去离子水冲洗后才可以使用。5、避免与铁器接触，以防铁污染。

6、标准品呈色24h稳定，血清呈色30min内稳定，随着时间的延长，颜色会慢慢加深，应在1h内比色完毕。

7、0.97是体积校正值。

8、该法批内差异CV≤3.1%;批间差异CV≤2.6%。

有效期∶6个月有效﹔常温运输，4C保存。