蛋白marker的分类

蛋白marker的分类

一. 未染色（pre mixed）蛋白分子量标准

未染色的蛋白分子量标准是-简单，也是准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，

是精-确判断蛋白大小必须的。现在的Marker多数都选用预混和的Marker，方便不同大小的蛋白比较。预混的Marker通常有几条带加倍浓度

作为指示，因为混合的条带越多，越不好记，谁知道哪条是那条！数到眼都花了。所以当看到特别浓的那几条标志带就记得是哪里了。

不过要记得，小带通常都不那么容易看清楚的。在选择上来说，当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的-好，越近越好

。如果你的蛋白不幸在两条跨度较大Marker条带之间，选别的Marker吧。预混的Marker使用上不如预染Marker（pre-stained）好用，

因为电泳过程中看不到，要和目标蛋白一起等到后染色才“开蛊"，无法对实验起预示参照作用。属于“后知后觉"型的，

当然还是比“不知不觉"不做对照的要好。

① 宽分子量蛋白标准

如果从实验室总体考虑的，就选范围尽量宽，条带分布比较均匀的，这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断，避免正好落在一段空白区的

危险。不过条带越多，每次上样量也就越费。拿到Marker后，如果买的是大包装，就应该考虑分装。多次反复冻融对于蛋白的危险，

不用多说吧。另外要记得，宽谱的Marker不一定每条都能看到的，特别是Mini Cell。如果侧重大蛋白，那小的可能就已经跑掉了，

不是质量不好哦。

② 高分子量蛋白标准

通常在检测大分子量蛋白经常使用到高分子量蛋白标准，

③ 低分子量蛋白标准

在一般的蛋白电泳当中，更常用的是低蛋白标准分子量，除了有指示蛋白大小的作用以外，有时还可以用作粗略的定量。实验室用在一般

蛋白电泳的低分子量蛋白标准中。

在低分子量蛋白标准这里还包括可特别小的蛋白标准，比如30kD以下蛋白或者多肽的分离辨别。其中GE的从2kD到16kD之间有6条带的蛋白

标准挺不错，另外提醒一句，特别小的蛋白Marker条带如果要显色好，上样一定要上足够的量哦。

二.预染蛋白分子量标准

预染蛋白分子量是一些纯化好的蛋白混合物，通过与染料共价耦联，在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便

了我们的实验，这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后，以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如，已知垂直电泳-

佳分辨区域大约在胶的2/3处，如果使用预染Marker就可以预测目标蛋白进入-佳分辨区时停止电泳以得到-佳分辨效果；

如果观察到Marker电泳异常也可以及时终止电泳；另外在Western Blot转膜以后可以直接观察蛋白转膜是否，

还可以在膜上标记蛋白分子量，所以吸引了许多实验室人员购买预染蛋白标准。值得注意的是预染蛋白Marker与染料共价耦联，

所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化，可能导致一些偏差，所以不太适合精-确定位蛋白——不过多数情况下

Marker的条带未必能和我们的目标蛋白一样，我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小，后都需要Western来定性，

所以如果不是要区分大小相近的条带，预染Marker还是很好用的，而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。

预染蛋白标准可以分为两种：单色预染和多色预染，其实区别就在于帮助在实验过程中辨认某个条带的大小——Marker条带越多参考价值越

大，可就越难辨认区分，如果用不同的颜色来区别就比较好辨认啦。如果沉闷的电泳实验中跑出五颜六色的彩虹Marker，

此时心情想必会愉快一些！单色的Marker通常是利用其中某些条带加倍浓度来提示其大小的。还有一点特别要注意，由于转膜是一个将胶里

的Marker浓缩在洁白的膜上，所以需要的上样量相对少一些，如果想要在电泳过程中看到美丽的“彩虹"，或者单色的Marker往往需要比

说明书里多加一些Marker的。