如何选 ELISA 试剂盒

如何选 ELISA 试剂盒

市面上的 ELISA 试剂盒五花八门，质量良莠不齐。如何浪里淘金，选择既符合科研需求，又品质上乘的 ELISA 试剂盒呢?

教你七招，快速搞定 ELISA 试剂盒的选择！

01 查找待测样本的蛋白浓度

通过检索 SCI 文献、Genecards、Mayocliniclabs 等，获得目标蛋白的表达部位及表达浓度参考值，比较 ELISA 试剂盒中给出

样本测值与参考值是否一致。

02 明确试剂盒的应用种属＆检测的样本类型

不同厂家验证的样本类型不同。除试剂盒特别说明外，一般情况下，不同种属不能通用。常见待测样本类型有：血清、血浆、细胞

上清、组织匀浆、细胞裂解液等。实验前，需要判断试剂盒能否满足目标物种的目标蛋白检测。

03 明确试剂盒的检测范围

试剂盒的检测范围即标准曲线范围。标准曲线范围不等同于样本浓度范围，所以，要特别注意判断待测样本浓度是否落在标准曲线

范围内。对于浓度很高的样本，建议先通过预实验，摸索出合适的稀释倍数后，再大量测定样本。

04 明确试剂盒的国际质控标准

1 稀释线性

一般指样本稀释线性，即：将样本梯度稀释，看各稀释梯度浓度是否成线性；对于高浓度样本，建议选择 OD 值落在标曲范围中

部的稀释倍数为最佳稀释倍数。

2 回收率

评估试剂盒测量结果趋于真实值程度的指标。一般添加标准品（重组蛋白）到天然样本基质内，进行测定。通常，线性及回收率的

范围在 80%-120% 比较合适。

3 天然样本检测

确保试剂盒可以检测天然样本及合适的样本类型。可根据靶蛋白性质对天然样本进行选择，例如：血清、血浆、细胞上清、尿液

、唾液和乳汁等。

4 交叉反应

通过交叉反应评估试剂盒的特异性。交叉反应越小，说明试剂盒的特异性越好。

✔与同家族其他蛋白或结构类似物的交叉反应。

✔与其他种属相同靶点蛋白的交叉反应。

✔与血清中常见因子的交叉反应。

5干扰试验

判断其他分子与抗原-抗体对之间相互作用的影响。干扰性越大，待测物测定值越不准确。

✔评估靶蛋白配体的干扰。

✔评估靶蛋白受体的干扰。

6稳定性

判定试剂盒在规定条件下储存时间长短的标准。一般通过热加速稳定性实验验证。

✔将试剂盒在 37℃ 条件下放置 7 天，与 4℃ 条件下放置的相同产品进行比较。

✔各项性能检测结果的偏差均应 ＜15%。

7 精密度

试剂盒重复实验时，误差大小的评估标准。通常用 CV 表示。一般情况下，批间、批内变异系数（CV）均应＜15%。

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