大肠杆菌基因组 DNA提取试剂盒(CTAB沉淀法)
一、产品简介:
大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)属于革兰氏阴性短杆菌,大小0.5×1~3微米,周生鞭毛,能运动,无芽孢,能发酵多种糖类产酸、产气,是人和动物肠道中的正常栖居菌,婴儿出生后即随哺乳进入肠道,与人终身相伴,几乎占粪便干重的1/3,获得DNA的量很高,纯度一般但足够用于大多数分子生物学实验,CTAB是一种阳离子去污剂,在高离子强度的溶液里CTAB与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸,因此CTAB可从产生粘多糖的有机体如植物及某些革兰氏阴性菌中制备纯化DNA。
上海雅吉生物科技有限公司登录正版大肠杆菌基因组DNA提取试剂盒(CTAB沉淀法)是简便的利用CTAB取大肠杆菌基因组DNA的试剂盒,其提取原理是利用蛋白酶K消化蛋白,CTAB沉淀多糖,再经加热使蛋白变性与DNA分离,乙醇沉淀核酸获得基因组DNA,可进行酶切、PCR等下游实验。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
二、产品组成:
名称 | 50T | 100T | Storage |
试剂(A): 蛋白酶K | 10mg | 10mg | 4℃ |
试剂(B): ECo 裂解液 | 1.5ml | 2*1.5ml | RT |
试剂(C): CTAB沉淀液 | 10ml | 20ml | RT |
试剂(D): 蛋白清除液 | 50ml | 100ml | 4℃避光 |
试剂(E): Eco漂洗液 | 100ml | 200ml | RT |
试剂(F): TE buffer | 50ml | 100ml | RT |
三、自备材料:
1、离心管
2、离心机
3、摇床
4、恒温箱或水浴锅
5、70%乙醇
四、操作步骤(仅供参考):
1、准备工作∶取0.5ml TE Buffer加至蛋白酶K中,充分混匀,配制成20mg/ml的白酶K溶液,可分装成小份,-20保存1年有效。
2、取1.5ml菌液置于EP管,10000g 离心2min,弃上清液,再次加入1.5ml菌液,重复该步骤1次。
3、加入30ul Eco裂解液和3l白酶K溶液(20mg/ml),充分混匀,37C孵育1h.
4、加入180ul CTAB沉淀液,充分混匀,65C孵育10min。
5、加入780ul蛋白清除液,充分混匀,12000g离心5~10min。
6、转移上清至新EP管,加入2倍体积的Eco漂洗液,混匀,-20℃放置30min或过夜。
7、13000g 离心10min,弃上清液,加入70%乙醇洗涤沉淀。
8、13000g离心10min,弃上清液,室温干燥DNA沉淀,加入100ul或适量TE Buffer ,溶解沉淀,-20℃保存;TE Buffer体积越大,DNA浓度越低。
五、注意事项:
1、用于裂解的噬菌体、宿主菌越新鲜,裂解越好、收获量越大。
2、Eco 裂解液在低温条件下会凝固,可用40~50C温水助溶。
3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
六、有效期∶6个月有效。
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