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丙酮酸检测试剂盒(二硝基苯肼微板法)

更新时间:2024-03-22      点击次数:249

丙酮酸检测试剂盒(二硝基苯微板法)

 

一、产品简介:

丙酮酸(Pyruvic acid,PA)又称2-氧代丙酸,是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一,可通过乙酰辅酶A和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化,丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。丙酮酸是糖无氧代谢的产物,科研工作者常将丙酮酸和乳酸一起研究,并用二者的比值推算循环衰竭的程度。丙酮酸检测可采用乳酸脱氢酶催化法或二硝基苯肼比色法。

上海雅吉生物科技有限公司登录正版丙酮酸检测试剂盒(二硝基苯肼微板法)检测原理是在酸性条件下,丙酮酸与二硝基苯肼反应,生成丙酮酸-二硝基苯腙复合物,后者经氧化呈棕红色,通过酶标仪测定520nm处吸光度,据此通过与标准曲线对比可以计算出PA水平。该试剂盒可用于检测植物、细胞或组织、血清等样品中内源性的丙酮酸含量,尤其适用植物样品丙酮酸含量的检测。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

 

二、产品组成:

名称

100T

Storage

试剂(A):丙酮酸标准(6mg/ml)

1ml

4℃避光

试剂(B):组织匀浆液(3×)

100ml

RT避光

试剂(C):苯肼显色液

3ml

4℃避光

试剂(D): PA Assay Buffer (1.5×)

10ml

RT

 

三、自备材料:

1、离心管或小试管

2、蒸馏水

3、酶标仪、96孔板

 

 

四、操作步骤(仅供参考)

1、配制组织匀浆液(1×)∶取10ml组织匀浆液(3×)加入20ml蒸馏水即成。

2、配制PA Assay Buffer (1x)∶取10ml PA Assay Buffer (1.5×)加入5ml蒸馏水即成。

3、准备样品︰

①血清、尿液及其他体液样品:血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-20°C冻存。

②组织样品︰称取1g组织样品置于匀浆器中,再加入1ml组织匀浆液(1x)仔细研磨,振摇提取静置30min ,取上清液4000rpm离心10min ,取上清液,用组织匀浆液(1×)定容至2ml , -20℃冻存,用于PA的检测。

③植物材料︰称取1g植物材料置于匀浆器中,再加入1ml组织匀浆液(1×)仔细研磨,振摇提取,静置30min ,取上清液4000rpm离心10min ,取上清液,用组织匀浆液(1×)定容至2ml , -20℃冻存,用于PA的检测。

④高浓度样品:如果样品中含有较高浓度的PA,可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释,如鸡血清可稀释5~10倍后检测。

4、配制标准品工作液︰如果检测血清、尿液等样品,按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水=199的比例配制使浓度达到60μg/ml如果检测组织样品按丙酮酸标准(6mg/ml) :组织匀浆液(1×)=1:99的比例配制,使浓度达到60μg/ml。

 

a、检测血清、尿液等样品时,用96孔板按下表操作:

加入物(μl

1

2

3

4

5

6

丙酮酸标准(60μg/ml,蒸馏水配制)

2.5

5

7.5

15

30

45

蒸馏水

72.5

70

67.5

60

45

30

丙酮酸浓度(μg/ml)

2

4

6

12

24

36

 

b、检测组织样品时,用96孔板按下表操作:

加入物(μl

1

2

3

4

5

6

丙酮酸标准(60μg/ml,蒸馏水配制)

2.5

5

7.5

15

30

45

组织匀浆液(1×)

72.5

70

67.5

60

45

30

丙酮酸浓度(μg/ml)

2

4

6

12

24

36

 

5、PA加样︰按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的PA浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置平行管。

 

a、检测血清、尿液等样品时,用96孔板按下表操作:

加入物(μl

空白孔(血清等)

标准孔

测定孔

蒸馏水

75

-

-

蒸馏水稀释后的各丙酮酸标准

-

75

-

代测样本

-

-

75

显色液

25

25

25

充分混匀

PA Assay Buffer

125

125

125

 


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