如何选择细胞培养基

如何选择细胞培养基？

培养基 是培养环境中最重要的组成部分，因为它为细胞生长提供了必要的营养、生长因子和激素，并调节培养物的pH值和渗透。

尽管最初的细胞培养实验使用从组织提取物和体液中获得的天然培养基进行，但对标准化和培养基质量的需求不断增长，

促进了化学成分确定的培养基的发展。

培养基的种类培养基的三个基本类别分别是基础培养基、减血清培养基和无血清培养基，三种培养基对血清添加的要求有所不同。

基础培养基大多数细胞系在含有氨基酸、维生素、无机盐和碳源（例如葡萄糖）的基础培养基中生长良好，但在这些基础培养基

的配方中必须进一步添加血清。

减血清培养基减血清培养基是在细胞培养实验中，减少血清不良影响的另一种策略是使用减血清培养基。减血清培养基是富含营养

物质和动物源性因子的基础培养基配方，可减少所需的血清量。

如何选择细胞培养基？无血清培养基无血清培养基（SFM）通过用适当的营养和激素配方替代血清，避免了使用动物血清的问题。

无血清培养基配方适用于许多原代培养物和细胞系，包括用于生产重组蛋白的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞系、各种杂交瘤细胞系

、昆虫细胞系Sf9和Sf21（草地贪夜蛾）以及用作病毒生产宿主的细胞系（例如293、VERO、MDCK、MDBK等）。使用无血清

培养基的主要优势之一是，能够通过选择生长因子的适当组合使培养基对特定细胞类型具有选择性。下表列出了无血清培养基的

优点与缺点。

细胞培养基最佳实践方案下面是细胞培养基实践方案的一些简单的提示和技巧，可以帮助您确保细胞培养基保持最佳性能。

我们提供各种经典的基础培养基、减血清培养基和无血清培养基，以及生长因子、添加剂、抗生素和试剂，供您进行细胞培养实验

。  如何选择细胞培养基？

细胞培养步骤

a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的培养液收集至离心管中，留5ml培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；

如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 添加1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA）至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞

消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，使之脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL

培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱

中培养。

b、细胞冻存：

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml培养液终止消化，再轻轻吹打

细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；

3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的上海雅吉生物科技有限公司登录正版无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。

4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。

C、细胞复苏：

1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精

擦拭冻存管外壁；

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3、弃上清，沉淀用5ml培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；

4、第二天，换用新鲜培养基继续培养。

注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。可按此方法：将培养瓶所有培养液收集至离心

管，1000rpm离心5min，

收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml培养基终止反应。

再离心，弃上清，加1-2ml培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的培养基至5-8ml/瓶，

最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。 如何选择细胞培养基？

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