细胞培养/细胞实验操作步骤

细胞培养/细胞实验操作步骤

一、细胞培养时的注意事项：

       1、确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借

用别人的溶液。

       2、确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。

       3、确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。

       4、确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

       5、尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口

周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。

       6、操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。

       7、实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

二、细胞污染的预防

       1、实验用品防止污染。细胞培养所用试剂、耗材、器材的清洗、消毒。各种溶液灭菌要仔细，并在无菌实验检测阴性后才能

使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁、消毒、灭菌。

       2、操作过程防止污染。

       3、穿着容易起静电或吸附灰尘的衣物必须更换为白大褂后才能进入细胞间。

       4、实验开始前需要确定戴的手套没有问题，只要接触过生物安全柜之外的物品，必须及时对手套进行消毒。

       5、进入细胞培养间后关好门，坐下来尽量少走动以免影响生物安全柜的风帘。工作开始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶盖。

事先要严格检查所用的器材、溶液和细胞，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大规模污染。

       6、细胞操作时动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口放在火焰周围简单转动烧灼，注意不要让火焰把塑料

瓶口烧化。

       7、实验操作时生物安全柜的隔板要尽可能放低，尽量减少谈话，打喷嚏或咳嗽时绝对不能对着工作区，以免造成不必要的

污染。

       8、瓶盖应当倒放在远离自己的地方，以避免瓶盖被误操作所污染。

       9、不要从敞开的容器口上方经过，以避免衣服上掉落不明物体对细胞的污染。

       10、实验操作时要注意及时更换巴斯德吸管、移液枪枪头和移液管，切勿一根管子做到底。一旦发现接触了非洁净或者无法

确定洁净的物品必须直接丢弃。实验完毕应及时收拾，保持实验室清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

三、防止细胞交叉污染

       1、在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，最好作上标记便于辨别。按顺序进行操作，一次只处理一种细胞，

多种细胞多种操作一起进行时易发生混乱。

       2、在进行换液或传代操作时，粘有细胞的移液枪头和移液管不要触及试剂瓶瓶口，以免把细胞带到培养基中污染其他细胞。

       3、所有细胞一旦购置，或从别处引入，或自己建立，必须及时保种冻存，一旦发生污染可重新复苏细胞，继续培养。